Follicle Viability after Vitrification of Bovine Ovarian Tissue / Viabilidade folicular após a vitrificação de tecido ovariano bovino

Abstract Purpose The present study aimed to evaluate the impact of vitrification on the viability of follicles using a three-dimensional (3D) in vitro culture. Methods Bovine ovarian tissue samples (n = 5) obtained from slaughterhouses were utilized. The cortex was cut into small fragments of 2 x 3 x 0.5 mm using a tissue slicer. From these fragments, secondary follicles were first isolated by mechanical and enzymatic methods, then encapsulated in alginate gel and individually cultured for 20 days. Additional fragments of the same ovarian tissue were vitrified in a solution containing 25% glycerol and 25% ethylene glycol. After warming, the follicles underwent the same follicular isolation process that was performed for the fresh follicles. Results A total of 61 follicles were isolated, 51 from fresh ovarian tissue, and 10 from vitrified tissue. After the culture, the vitrified and fresh follicles showed 20% and 43.1% survival rates respectively (p = 0.290),with no significant differences. At the end of the culture, therewere no significant differences in follicular diameter between the vitrified (422.93 ± 85.05 μm) and fresh (412.99 ± 102.55 μm) groups (p = 0.725). Fresh follicles showed higher mean rate of antrum formation when compared with vitrified follicles (47.1% and 20.0% respectively), but without significant difference (p = 0.167). Conclusions The follicles were able to develop, grow and form antrum in the 3D system after vitrification, despite the lower results obtained with the fresh tissue.

Resumo Objetivo O presente estudo teve como objetivo avaliar o impacto da vitrificação na viabilidade dos folículos utilizando a cultura in vitro tridimensional (3D). Métodos Foi utilizado tecido ovariano bovino (n = 5) obtido de abatedouros. O córtex foi cortado em pequenos fragmentos de 2 x 3 x 0,5 mm, utilizando o tissue slicer e a partir destes fragmentos foram isolados folículos secundários por meio de método enzimático e mecânico, encapsulados em gel de alginato e cultivados individualmente durante 20 dias. Outros fragmentos do mesmo tecido ovariano foram vitrificados em solução contendo 25% de glicerol e 25% de etilenoglicol. Após aquecimento, os folículos passaram pelo mesmo processo de isolamento folicular realizado a fresco. Resultados Foram isolados 61 folículos, sendo 51 originários de tecido ovariano a fresco, e 10 de tecido vitrificado. Após a cultura, os folículos vitrificados apresentaram taxa de sobrevida de 20%, e o grupo a fresco apresentou taxa de 43,1% (p = 0,290). O diâmetro folicular ao final da cultura também não apresentou diferença significativa entre o grupo vitrificado (422,93 ± 85,05 μm) e a fresco (412,99 ± 102,55 μm) (p = 0,725). Os folículos a fresco apresentarammaior taxa média de formação de antro do que os folículos vitrificados (47,1% e 20,0%, respectivamente), mas sem diferença significativa (p = 0,167). Conclusões Os folículos foram capazes de se desenvolver, crescer e formar antro em sistema 3D após a vitrificação.

Indução de ovulação em pacientes com tumor estrogênio­dependente: diretrizes clínicas da Sociedade Brasileira de Reprodução Humana / Ovulation induction in patients with estrogen­dependent tumors: a Brazilian Society of Human Reproduction clinical practice guideline

A oncofertilidade é um campo de interesse interdisciplinar de desenvolvimento recente que busca mesclar os conhecimentos em oncologia e medicina reprodutiva, com a contribuição das técnicas de reprodução assistida, para o desenvolvimento de estratégias de preservação da função gonadal e oferecer a possibilidade da procriação biológica aos sobreviventes de câncer. As estratégias de preservação da fertilidade feminina em pacientes oncológicas atualmente aceitas para a prática rotineira são a criopreservação de embriões e a criopreservação de oócitos maduros. Ocorre que, para execução de ambos, a indução de ovulação é obrigatória e, com ela, vêm os riscos teóricos de estimulação do crescimento de tumores estrogênio­dependentes e a postergação do início do tratamento antineoplásico. Os protocolos de estimulação ovariana de início aleatório contemplam a intenção de se minimizar o atraso no início da quimioterapia ou radioterapia e o bloqueio ao crescimento tumoral e oferecem resultados satisfatórios, semelhantes aos obtidos em protocolos de início habitual. Apresentamos neste artigo as diretrizes clínicas da Sociedade Brasileira de Reprodução Humana para indução de ovulação em pacientes com tumor estrogênio­dependente.(AU)

Oncofertility is an interdisciplinary interest field of recent development, which aims to merge the knowledge in oncology and reproductive medicine, with the help of assisted reproductive technologies, to develop strategies for gonadal function preservation and to offer the possibility of biological procreation to cancer survivors. Preservation strategies of female fertility in oncological patients currently accepted for routine practice are the cryopreservation of embryos and cryopreservation of mature oocytes. It happens that ovulation induction is mandatory for executing both strategies, and with it the theoretical risk of stimulation of estrogen­dependent tumors growth and the postponement of anti­neoplastic treatment. Random­start ovarian stimulation protocols include the intention of minimizing the delay in onset of chemo­radiotherapy and to block tumor growth, providing satisfactory results, similar to those obtained in the usual beginning protocols. This article presents the clinical guidelines of the Brazilian Society of Human Reproduction for ovulation induction in patients with estrogen­dependent tumors.(AU)

Comparison between Slow Freezing and Vitrification in Terms of Ovarian Tissue Viability in a Bovine Model / Comparação da viabilidade do tecido ovariano após congelamento lento e vitrificação em modelo bovino

Abstract Objective To assess the viability of bovine ovarian tissue after cryopreservation through either slow freezing or vitrification, and to compare it to that of control tissue by performing morphological analyses. Methods The study included 20 bovine ovarian cortex fragments that were divided into control, vitrification, and slow freezing groups. Each group consisted of four fragments of the same ovary, two fixed without cultivation, and two fixed with cultivation. Tissues were evaluated based on follicular morphology immediately after heating and after 7 days of culture, and compared with the control group. Results A total of 240 fragments were analyzed, generating a sample of 1,344 follicles without cultivation and 552 with cultivation. When the non-cultivated samples were classified as non-atretic follicles, 572 were found in the control group, 289 in the vitrification group, and 373 in the slow freezing group, showing no significant differences. When classified as atretic, 46 follicles were found in the control group, 23 in the vitrification group, and 41 in the slow freezing group, also showing no statistical difference. In the post-culture sample, an evolution of the follicular stages could be observed. This finding was important to support that the follicles considered non-atretic in the non-cultivated group were actually viable in the morphological evaluation. Conclusion With no differences between the protocols, vitrification was shown to be an advanced and alternative method for patients who will undergo treatments that.

Resumo Objetivo avaliar a viabilidade do tecido ovariano bovino após a criopreservação, utilizando congelamento lento e vitrificação, e comparando com o tecido controle por meio de análises morfológicas. Métodos o estudo incluiufragmentos de córtex de vinte ovários bovinos divididos em grupos controle, vitrificação e congelamento lento. Cada grupo foi composto por quatro fragmentos do mesmo ovário, sendo dois fragmentos fixados sem cultivo e dois fragmentos fixados pós-cultivo. Os tecidos foram avaliados pela morfologia folicular logo após o aquecimento e após sete dias de cultivo, e comparados com o grupo controle. Resultados um total de 240 fragmentos foi analisado, gerando uma amostra de 1.344 folículos sem cultivo e 552 pós-cultivo. Quando a amostra sem cultivo teve seus folículos agrupados em não atrésicos, obtivemos 572 no grupo controle, 289 no vitrificação, e 373 no congelamento lento, não apresentando diferença estatística. Quando agrupados em atrésicos, o grupo controle apresentou 46 folículos, o vitrificação, 23, e o congelamento lento, 41, não apresentando também diferença estatística. Na amostra pós-cultivo, podemos observar uma evolução dos estágios foliculares: esse achado foi importante para sustentar que os folículos considerados não atrésicos na avaliação morfológica sem cultivo estavam realmente viáveis. Conclusão não havendo diferenças entre os protocolos, a vitrificação se mostra um avanço e um método alternativo para pacientes que irão se submeter a tratamentos que podem levar a uma falência ovariana, uma vez que a metodologia é mais barata, mais rápida e mais bem adaptável a uma rotina de um laboratório.

Preservação da fertilidade em mulheres com câncer: atualização e perspectivas / Fertility preservation in women with cancer: update and perspectives

Com o aumento do diagnóstico de câncer em mulheres jovens e os avanços no seu tratamento, muitas pacientes que poderão ter sua fertilidade comprometida com a quimioterapia têm manifestado desejo de engravidar futuramente. O congelamento de embriões, após fertilização in vitro, para preservar a fertilidade está bem estabelecido. A criopreservação de oócitos por vitrificação evoluiu bastante nos últimos anos, deixando de ser experimental. Até 2009 nasceram mais de 900 crianças a partir de oócitos criopreservados, sem aumento do risco de anomalias congênitas. O uso de análogos do GnRH para a supressão ovariana durante a quimioterapia na tentativa de prevenir a falência ovariana prematura apresenta resultados incertos. Outras técnicas ainda são consideradas experimentais, como a criopreservação e posterior autotransplante de tecido ovariano. Já foram relatados 24 nascimentos com o seu uso, persistindo, entretanto, dúvidas que motivam o seu estudo. A maturação de folículos ovarianos in vitro é alternativa promissora para preservação da fertilidade nessas pacientes e tem apresentado resultados positivos em roedores, macacos e humanos. Muita cautela deve ser tomada com o uso de técnicas experimentais, especialmente quando oferecidas para pacientes diante de fragilidade emocional. Por isso, é importante transmitir corretamente informações sobre chances de gravidez com tratamentos existentes e as limitações das técnicas experimentais...

With the increased number of cancer diagnoses among young women and the advances in treatment, many patients who may have had their fertility compromised by chemotherapy express desire to become pregnant in the future. Freezing embryos for later IVF so as to preserve fertility is a well established process. Oocyte cryopreservation by vitrification has evolved greatly in recent years and is no longer considered experimental. By 2009 more than 900 children were born from cryopreserved oocytes, without increased risk of congenital anomalies. The preventive use of GnRH analogues for ovarian suppression during chemotherapy to avoid premature ovarian failure has uncertain outcomes. Other techniques such as cryopreservation of ovarian tissue for later autograft are still considered experimental. Although use has already been reported in 24 births, doubts still persist and motivate further study. In vitro maturation of ovarian follicles is a promising alternative for preserving patient fertility and has shown positive results in rodents, monkeys, andhumans. Caution should be used with experimental techniques, especially when offered to emotionally fragile patients. Therefore it is important to thoroughly convey information on the chances of pregnancy with existing treatments and the limitations of experimental techniques...

Fitoestrogênios: valor terapêutico no climatério / Phytoestrogens: therapeutic value in climacteric

Os fitoestrogênios são um grupo de componentes não-esteróides com propriedades estruturais e funcionais semelhantes às dos estrogênios. As isoflavonas (genisteina e daidzeina) são as mais conhecidas nesse grupo. Seu mecanismo de ação se dá por meio de sua interação com os receptores estrogênicos; possuem efeitos antioxidantes e propriedades de inibição enzimática. Devido à sua capacidade de interagir com os receptores estrogênicos, tem-se aventado a sua utilização como alternativa à terapia de reposição hormonal no climatério. Embora a maioria dos estudos demonstre um efeito benéfico nos sintomas do climatério, há controvérsias. Os dados disponíveis no momento são controversos com relação à prevenção de doenças cardiovasculares e osteoporose.

Phytoestrogens are non-steroid compounds that have structural and functional properties similar to estrogens. The isoflavones (genistein and daidzein) are well known among these components. Isoflayones have antioxidant effects and anti-enzyme properties. In addition, isoflavones interact with estrogen receptors, opening the possibilitv of their utilization as a possible alternative to the usual hormone replacement therapy in the climaterium.

Função cognitiva na pós-menopausa / Cognition in menopause: effects of estrogen therapy

Com o propósito de avaliar o efeito do estrogênio na função cognitiva de mulheres na pós-menopausa, compararam-se os resultados do uso da terapia estrogênica com a utilização do placebo. Também se propôs estudar a relação entre os efeitos do tratamento nos sintomas climatéricos e depressivos e os resultados dos testes de função cognitiva. A metodologia utilizada foi o estudo duplo-cego, randomizado, controlado, comparando o uso de 2 mg de 17-beta-estradiol por via oral com o placebo. As pacientes estudadas eram mulheres na pós-menopausa, com idades entre 48 e 65 anos, com 8 anos de instrução formal. Excluíram-se mulheres com depressão moderada ou grave, com demência, usuárias de medicações com ação sobre o sistema nervoso central ou com contra-indicações à reposição hormonal. As 74 mulheres incluídas foram avaliadas em relação à função cognitiva, sintomas depressivos e climatéricos antes e depois de 12 semanas de terapia hormonal, utilizando-se os seguintes testes psicométricos: Mini-mental, Evocação Imediata e Tardia de Estória, Span de Dígitos, FAS, Teste Stroop, Dígito-simbolo, Trilhas A, Trilhas B e Teste dos sinos, além das Escalas de Depressão de Hamilton e Climatérica de Greene. Os grupos placebo e estradiol foram homogêneos em relação à idade, número de gestações, tempo de pós-menopausa, índice de massa corporal e pontuação nos diferentes testes antes do inicio do tratamento. Ao final do estudo, os resultados mostraram melhora significante apenas no grupo que usou estradiol nos seguintes testes: Evocação Imediata e Tardia de Estória e Escalas de Greene e Hamilton. Houve melhora em ambos os grupos nos testes FAS, Stroop e Sinos. Entretanto, ao se comparar os grupos, o único teste que mostrou diferença significante foi a Escala Climatérica de Greene. Observou-se ainda uma relação direta entre a redução dos sintomas climatéricos e o melhor desempenho apenas no Teste Stroop

Tensão pré-menstrual / Premenstrual syndrome

A Tensão pré-menstrual é condição que inclui sintomas físicos, emocionais e cognitivos, afetando 75 porcento das mulheres no menacme, ocorrendo exclusivamente durante a fase lútea do ciclo menstrual. Cerca de 3 a 5 porcento das pacientes afetadas apresentam a sua forma grave (distúrbio disfórico pré-menstrual). O diagnóstico exige anamnese e exame físico minuciosos para excluir outras causas de sintomas físicos ou emocionais. Não há um consenso sobre a sua etiologia, sendo descritos fatores biológicos, emocionais, comportamentais, socioculturais e genéticos. O tratamento inclui medidas gerais, intervenções no estilo de vida, suplementos nutricionais e tratamento farmacológico, sendo seu objetivo uma boa qualidade de vida, pela redução dos sintomas, com melhora das funções sociais

Infertilidade e Emoçäo / Infertility and Emotion

Os aspectos psicológicos vivenciados pelos casais inférteis apresentam certas particularidades, podendo interferir na relaçäo do casal, nas relaçöes familiares e sociais e, em alguns casos, também no desempenho profissional. O conhecimento destas particularidades é de fundamental importância para que possamos ajudar esses casais durante o tratamento de infertilidade

Prognóstico de fertilidade após uma gestaçäo ectópica / Fertility outcome after an ectopic pregnancy

Os tratamentos propostos para a gravidez ectópica devem ser particularizados, para que cada paciente possa receber uma abordagem adequada, reservando-se o direito do melhor prognóstico. O tratamento pode ser conservador, desde que sejam obedecidos rigorosos critérios e cuidados; medicamentos, em condiçöes especiais e com o devido acompanhamento; e cirúrgico, ainda observando-se a melhor via para sua realizaçäo. Esta revisäo visa dar ao médico assistente melhores condiçöes para a individualizaçäo de cada caso.

Falência ovariana prematura e gravidez / Premature ovarian failure and pregnancy

A falência ovariana prematura é uma condiçäo caracterizada por amenorréia, infertilidade, deficiência dos hormônios sexuais e elevaçäo das gonadotrofinas em mulheres com idade inferior a 40 anos. Os autores relatam a ocorrência de uma gravidez em uma paciente de 32 anos portadora de amenorréia hipergonadotrófica, em uso de terapia de reposiçäo hormonal (TRH).

Síndrome de hiperestimulaçäo Ovariana / The ovarian hyperstimulation syndrome

A Síndrome de Hiperestimulaçäo Ovariana (SHO) é uma complicaçäo relativamente freqüente em ciclos de reproduçäo assistida, podendo representar um risco de vida para algumas pacientes. Várias pesquisas vêm sendo realizadas com o objetivo de esclarecer a fisiopatologia desta síndrome, permitindo assim uma prevençäo mais eficaz e um tratamento adequado dessas pacientes. A identificaçäo das formas graves é de fundamental importância para que se evite maiores complicaçöes.

Gestaçäo de substituiçäo / Surrogate mother

O presente estudo faz uma análise dos principais aspectos da gestaçÝo de substituiçÝo e relata o primeiro caso inserido no programa de DoaçÝo Temporária de ùtero do FERTIMATER - Unidade de ReproduçÝo Humana do Hospital Mater Dei. Os autores destacam aspectos relacionados às indicaçSes, escolha dos casais envolvidos, técnica e discutem a atual posiçÝo ética e legal para o precedimento. Concluem que a doaçÝo temporária de útero representa uma alternativa real, e já disponível em nosso estado, para que pacientes se útero funcional atinjam a maternidade

Programa de doaçäo de oócitos na Unidade de Reproduçäo Humana do Hospital Mater DEI: Fertimater / Oocyte donation program at the Hospital Mater Dei Human Reproduction Unit: Fertimater

O programa de doaçäo de oócitos do Fertimater foi implantado em 1994 com a finalidade de beneficiar casais inférteis com fator feminino. As pacientes com funçäo ovariana insuficiente, anormalidades genéticas e insucessos repetidos de FIV clássica constituem as principais indicaçöes para a doaçäo de oócitos. As pacientes doadoras foram submetidas a um protocolo de FIV, incluindo rastreamento para doenças infecciosas. As receptoras foram submetidas a um protocolo especial que consistia no preenchimento de consentimento informada, de uma avaliaçäo psicológica especializada, anamnese, exame físico e exames complementares (incluido HIV, HbsAg, VDRL e Machado-Guerreiro). Os ciclos menstruais das doadoras e receptoras foram sincronizados de acordo com a necessidade através de análogo de GnRH (acetado de Goserelina). Os oócitos foram obtidos a partir de pacientes que se submeteram a fertilizaçäo in-vitro e doaram seus óvulos excedentes ou entäo, através de doaçäo cruzada, sempre mantendo o caráter näo comercial e anônimo. Os óvulos foram inseminados com os gametas do parceiro da receptora e transferidos após 48 horas, no estágio de duas a quatro células. Um número máximo de quatro embriöes foram transferidos para o útero das receptoras e uma dosagem de ß-HCG sérico foi realizada após 12 dias para o diagnóstico de gravidez

Doaçäo cruzada de oócitos: relato de caso / Oocyte crossing donation: case report

Os autores relatam um caso de doaçäo de oócitos, programa implantado no Fertimater - Unidade de Reproduçäo Humana do Hospital Mater Dei - como alternativa para obtençäo de oócitos mantendo o caratér näo comercial e anônimo do ato. Dois casais inférteis, na mesma situaçäo clínica, trazem cada um uma doadora sendo os oócitos cruzados posteriormente. O casal A traz uma doadora de parentesco de primeiro grau cujos oócitos obtidos seräo usados no casal B, que por sua vez também traz uma doadora sendo seus oócitos utilizados pelo casal A